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听说,你的细胞又被污染了?
人阅读 发布时间:2021-10-18 16:35
细胞培养中的常见污染主要包括:细菌、霉菌、支原体、黑胶虫、病毒和交叉污染等,每一种污染都有各自的特点。如细菌和霉菌增殖迅速,短时间就对细胞造成明显伤害;而支原体和病毒对细胞的影响则是一种缓慢长期的过程。下面就具体看看每一种污染。
1. 细菌污染(较容易被发现)
引起原因:操作不规范或无菌措施不到位等;
细菌污染种类:白色葡萄球菌,大肠杆菌,假单孢菌、枯草杆菌等;
细胞污染后的变化:
①污染后由于有大量酸性物质产生,因此培养基会短时间内由红色变为黄色;
②由于细菌大量增殖,培养基变浑浊,稍微振荡后可见培养基表面有漂浮物;
③普通倒置显微镜高倍镜观察,胞浆内可见大量颗粒;
④细胞生长缓慢,逐渐变圆脱落。
细菌生长一般比较迅速,比真菌快,一般一天培养基就会浑浊变污染,在普通倒置显微镜下为黑色细沙状。污染后细胞发生病理改变,胞内颗粒增多、增粗,最后变圆脱落死亡。
处理措施:
-
在培养液中添加双抗(P/S)处理;可用抗生素的常用量的 5~10 倍作冲击疗法,用药 24~48h 后再换常规培养液;
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另外添加西司他丁钠和亚胺培南(泰能)处理细胞,适用于培养用具被打翻、使用了污染的培养液或要培养污染的组织或者冻存细胞的污染情况。
- 裸鼠体内接种法是比较有效和彻底的除菌方法。主要包括腹水接种和皮下荷瘤分离细胞。既能彻底清除污染细菌,又能保持肿瘤细胞的来源特征和恶性特性。对于一些特别珍贵的肿瘤细胞,可采用裸鼠体内接种法[2]。
2. 霉菌污染(较容易被发现)
引起原因:操作不规范或无菌措施不到位等;
污染种类:白色念珠菌,酵母菌,黑霉菌,曲霉菌,孢子菌等;
细胞污染后的变化:
①一般来说,培养液不会变浑浊;
②比较容易发现,肉眼可见点状菌落(淡黄色或者白色)漂浮在培养基表面;
③普通倒置显微镜下观察,可见絮状交错的菌丝或菌团生长在细胞之间;有时真菌并不是直接分布于细胞贴壁层,需要通过调整显微镜仔细观察寻找菌丝或菌团。
处理措施:
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添加制霉菌素和两性霉素 B,但是对细胞的毒性也较大;
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环境彻底消毒:先后用酒精、新洁尔擦洗培养箱;水盘加上饱和量的硫酸铜。
- 若细胞不是特别珍贵,建议丢弃。
3. 支原体污染(难被发现)
支原体是一种自然界中能独立生活的最小微生物,能通过细菌滤器,在细胞培养过程中,支原体感染发生率很高。由于支原体可以与细胞共存,生长速率受影响较小,而被忽视。支原体污染在细胞培养污染中最为隐蔽和最难察觉,但是支原体能明显影响宿主细胞代谢、RNA 合成及基因表达的作用,因此越来越受到重视。
引起原因:主要来源于是已感染支原体细胞之间的交叉污染,支原体感染的血清和胰酶等;
细胞污染后的变化:
①培养液不变浑浊,但会很快变成黄色;
②多数细胞在形态方面少有明显变化;
③在倒置显微镜下可见胞浆出现小颗粒或空泡;
支原体是介于细菌与病毒之间能独立生活的最小微生物,最小直径 0.2μm,它不能用过滤除去。光镜下难以看清形态结构。支原体无细胞壁形态呈高度多形性。可为圆形、丝状或梨形。
处理措施:
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定期用支原体试剂盒检测;
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换液可以减缓污染情况,但无法根除;
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支原体清除试剂盒可以达到较好效果;
- 小鼠腹腔巨噬细胞清除法。
4. 黑胶虫污染
引起原因:往往来源于血清;
细胞污染后的变化:
①低倍镜下观察时可见黑色小点,高倍镜下可见到其做布朗运动,像小虫游来游去;
②细胞培养液仍然清亮,污染较轻时对细胞无影响;若太多就会对细胞造成影响。
可以穿透滤膜,也可通过空气传播,低倍下为黑色点状,高倍下可看见黑色的小虫游来游去,培养液也是不浑的,一般不会太影响,细胞还是可以用的。常常是细胞生长状态良好,且观测到的运动物无明显增多,且培养液颜色、透明度无明显变化,可在同一批号的血清养的细胞中发现类似现象。对细胞生长状态不会有明显影响,在细胞增殖旺盛之后会自然消失。
处理措施:
- 更换血清;增加细胞密度,提高细胞的生长率。
5. 病毒污染
引起原因:病毒可能来自于血清;
细胞污染后的变化:
①污染后培养液无明显变化;
②大部分细胞也不会有明显的形态变化;
6. 交叉污染
引起原因:两种或两种细胞以上的实验同时进行,实验器具、试剂等混用而易造成的污染;
检测手段:可通过镜检观察细胞形态是否与所培养细胞形态一致来判断,另外还可以通过各种免疫学试验、同功酶分析及细胞遗传学方法来确定。
处理方式:针对病毒和交叉污染较难清除,建议丢弃细胞重新培养;
学会对各种污染情况的辨别和处理是一项不可或缺的实验技能,希望大家在看完我们的文章后结合你的实验操作,学会如何应对细胞污染。