免疫学三大实验的区别

想检测实验样本中的靶蛋白，但是ELISA、WB、IHC傻傻分不清，到底应该选择哪种方法呢？又该如何开展实验呢？

 

小百帮大家总结整理了ELISA、WB、IHC的标准实验流程，帮大家顺利搞定实验！

 

酶联免疫吸附测定（ELISA）、蛋白免疫印迹（WB）、免疫组化（IHC），是免疫学三大常用工具，应用于目的蛋白的定量、定性和定位分析。

这三种免疫学检测手段，都是基于抗原与抗体特异性结合的原理，其差异性在于：

◆ ELISA更适合定量检测胞外的分泌性蛋白

◆ WB多用于胞膜、胞浆或胞核蛋白的半定量检测

◆ IHC主要用于胞蛋白的定位

 

下面分为为大家介绍三大实验

 

蛋白免疫印迹（WB）

WB(Western Blot，蛋白免疫印迹)利用靶蛋白分子量大小不同的原理，用SDS-PAGE（凝胶电泳）分离蛋白质，将分离开的蛋白质用电转仪转移到固相载体（膜）上，然后利用抗原-抗体-标记物显色来检测目标蛋白含量。WB多用于胞膜、胞浆或胞核蛋白的定性和半定量检测。

免疫组化（IHC）

IHC(Immunohistochemistry，免疫组织化学技术)融合了免疫学原理（抗原抗体特异性结合）和组织学技术（组织的取材、固定、包埋、切片、脱蜡、水化等），通过化学反应，使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色，来对组织（细胞）内抗原进行定位、定性及定量的研究，其主要对胞内蛋白进行定位。

酶联免疫吸附测定（ELISA）

ELISA运用了免疫学原理和化学反应显色原理，需要将抗原或抗体预包被在固相载体表面，使后来形成的抗原-抗体-酶（荧光基团）-底物复合物黏附在载体上，通过检测OD值或发光值，来检测靶蛋白的含量。ELISA更适合定量检测胞外的分泌性蛋白。

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